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TGF-β1/Smad3信号转导通路对皮肤成纤维细胞调控作用的研究

熊杰  卫伟  马兵  夏照帆  李勤  余文林  程飚  
【摘要】:目的探讨TGF-β1/Smad3信号转导通路对皮肤成纤维细胞的具体调控作用及其机制。方法 将原代分离培养并经过鉴定的小鼠皮肤成纤维细胞(野生型和Smad3KO型)分为六组:野生型FB组、野生型FB+TGF-β1组、野生型FB+SB431542组、野生型FB+SB431542+TGF-β1组、Smad3KOFB组和Smad3KOFB+TGF-β1组。各组细胞经同步化处理后,直接以TGF-β1刺激或经SB431542预处理后再以TGF-β1刺激。收集细胞抽提总RNA,以实时荧光定量RT-PCR检测TGF-β1、Smad3、PCNA、MMP2、MMP9和TIMP-1的变化情况,细胞培养液上清经离心超滤浓缩后进行明胶酶谱分析,检测MMP-2和MMP-9的活性。结果 TGF-β1促进成纤维细胞中TGF-β1、Smad3、PCNA、MMP2、MMP9的表达,抑制TIMP-1表达;抑制Smad3可显著增加MMP2和MMP9的表达并降低TIMP-1表达。结论 Smad3抑制TGF-β1的自身正反馈,参与促进成纤维细胞增殖的信号途径,同时还对MMP2/9的表达起负向调控作用而对TIMP-1起正向调控作用。

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