极端热环境诱导乳鼠心肌细胞凋亡与Bim及caspase-3蛋白的表达

【摘要】：目的研究前凋亡蛋白Bim及caspase-3在极端热环境致乳鼠心肌细胞损伤中的作用。方法体外培养1-3d龄SD大鼠心肌细胞,建立心肌细胞热环境损伤模型(42℃,60min)。观察热处理后恢复37℃孵育0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h六个时间点心肌细胞损伤情况:倒置显微镜下观测各组心肌细胞搏动频率和节律;MTS/PMS法检测细胞存活率;全自动生化分析仪测定心肌细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting检测Bim及caspase-3蛋白表达。结果①体外培养乳鼠心肌细胞热处理后即刻(0h)搏动频率略有增加,并可见异常节律,此后恢复37℃孵育的各时间点搏动频率逐渐减慢,与对照组各时间点相比具有统计学意义(PP0.05)。且4 h、8 h两组存活率的下降与前一组相比具有统计学意义(P0.05);LDH水平随培养时间的延长逐渐升高,与对照组相比具统计学意义(P0.05),4 h、8 h两组LDH水平的增高与前一组相比也具有统计学意义(P0.05);同时观察到恢复37℃孵育12h后的存活率、LDH水平与8h相比均无统计学意义。②流式细胞术检测细胞凋亡率显示随恢复37℃孵育时间延长,各时间点细胞凋亡率较对照组有显著差异(P0.05),且8 h组与4 h组相比凋亡率明显上升,具统计学意义(PP0.05);caspase-3从恢复37℃孵育0 h即开始表达,与对照组相比有统计学意义(P0.05)。结论极端热环境使心肌细胞发生了损伤,以凋亡为主要损伤形式。前凋亡蛋白Bim与caspase-3可能参与了极端热环境致乳鼠心肌细胞凋亡的过程。