【摘要】：目的(1)研究大鼠心肌缺血再灌注损伤缺血12 h后血管紧张素转换酶2(ACE2)蛋白、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)表达水平;(2)给大鼠灌胃氯沙坦14天药理性预处理后,再建立大鼠心肌缺血30分钟再灌注12 h损伤模型,继续观察内脏组织ACE2蛋白,动脉血浆及心肌组织AngⅡ水平的变化;(3)通过氯沙坦药物性预处理,探讨心肌缺血再灌注损伤中血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(ARB)药物治疗效应的机制及ACE2蛋白在心肌缺血性疾病中表达的意义。方法使用套管法制作心肌缺血再灌注损伤模型,心肌缺血30 min后,随后再灌注12 h。以ST段骤降及复灌时左室前壁缺血区紫绀消失为再灌注成功标志。随机分为3组:Sham组为假手术组;MIRI组为缺血再灌注损伤模型组;Los组为氯沙坦组,于缺血前2周灌胃氯沙坦10mg/kg(Sham组与MIRI组均给予相当剂量的生理盐水灌胃)。到实验终点,取动脉血,加入抗凝剂抑肽酶,常温下3000 r/min离心10 min,分离出血浆,待测血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ);取左心室游离壁为缺血区心肌,室间隔为非缺血区心肌,待测心肌AngⅡ。以上指标使用放免法测定。实验完成后内固定组织器官,包埋成蜡块后切片、采取免疫细胞化学法染色,整个实验流程按试剂盒操作说明书进行。经免疫细胞化学法染色的切片在光学显微镜下放大400倍,图像经过摄像机转变成电信号并在监视器上显示。每张切片内中外层随机选取5个视野,使用ImageproPlus5.0软件分析各组织ACE2蛋白的表达水平,以IA值表示其相对含量。数据处理,应用SPSS11.5软件包,数据以均数士标准差表示;显著性检验采用多个样本均数比较,两两比较用ANOVA检验。结果(1)与Sham组比较,缺血再灌注损伤组肾小管上皮细胞、肝脏ACE2表达变化不明显,而缺血区心肌、睾丸组织中ACE2表达增多;(2)与MIRI12h组比较,药物干预后心肌缺血组织ACE2表达有所增多,肾脏表达变化不大;而肝脏等组织几乎不表达,睾丸组织表达增多不明显。(3)与缺血再灌注组比较,氯沙坦药物干预后心肌及血浆AngⅡ含量均无统计学差别;而心肌缺血再灌注晚期心肌组织与假手术组比较有统计学差别(P0.05)。结论(1)心肌缺血再灌注区ACE2表达上调出现于再灌注晚期,可能与延迟性再灌注损伤有关。(2)氯沙坦可促进心肌缺血再灌注区ACE2的表达增多,可能对心肌缺血再灌注组织中的ACE2蛋白分泌起到促进与加强作用。(3)缺血再灌注早期不能立即刺激心肌区ACE2蛋白表达增多;但远隔器官肾脏、睾丸有表达,特别是在血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(ARB)氯沙坦药物干预下,缺血区心肌ACE2的表达有所上调。(4)Losartan治疗组AngⅡ含量降低明显,这表明经过Losartan治疗后,降低全身AngⅡ含量明显。