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SIRT1在高糖刺激的内皮细胞中调控HO-1的表达

高鹏  周立全  张慧娜  陈厚早  刘德培  
【摘要】:目的研究SIRT1是否在内皮细胞内能够调控HO-1的表达。血红素加氧酶(Heme Oxygenase)家族三个成员中,只有HO-1可被诱导表达,其启动子区含有多个转录因子结合位点。多种生长因子,氧化刺激因素,抗氧化药物以及激素能够通过MAPK通路促进HO-1的表达,从而对高血压,动脉粥样硬化,血管损伤,血栓形成等心血管疾病起到抑制的作用。有文献报道称HO-1能够抑制糖尿病相关的血管内皮细胞损伤,而人类第三类组蛋白去乙酰化酶SIRT1的激活剂Resveratrol能够通过Nrf-2和NF-κB上调HO-1的表达。方法为了探究SIRT1是否能够通过上调HO-1的表达在高糖刺激下保护血管内皮细胞的功能,我们培养了原代的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),首先用15mM和30mM两种浓度的右旋葡萄糖分别刺激24小时和48小时后,用RT-PCR和Western Blotting的方法检测了SIRT1,HO-1以及HO-1上游转录因子HIF1-a,Nrf2和NF-κB的表达,进而取HUVEC分别用腺病毒Ad-GFP,Ad-SIRT1, Ad-DNSIRT1 H363Y感染24小时,检测以上基因的表达情况。结果发现SIRT1和HO-1在30mM高糖刺激下mRNA和蛋白表达水平均有下降,以24小时差别最明显,而HIF1-a,Nrf2和NF-κB的表达未见明显差异。在用腺病毒过表达SIRT1时,HO-1的表达水平也随之升高,而过表达乙酰化位点突变型的SIRT1时,HO-1的表达则没有变化,同时HIF1-a,Nrf2和NF-κB的表达也未见变化。结论以上结果表明,在高糖刺激的内皮细胞中,SIRT1和HO-1的表达具有同向性,而SIRT1也能够调控HO-1的表达,但并不是通过直接影响实验涉及的HO-1上游转录因子的表达,提示SIRT1可能是通过MAPK途径或去乙酰化相关转录因子以及调控HO-1启动子区染色质状态等机制对HO-1进行调控的,其具体机制有待进一步研究。

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