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二价双启动子防龋DNA疫苗的构建及鉴定

王小华  姜广水  吴钦贞  姜萍萍  刘浩  江浩  
【摘要】:目的:构建并鉴定具有在真、原核细胞中均可表达目的抗原而具备强免疫原性、针对致龋菌变形链球菌两种主要毒力因子的DNA疫苗。方法:利用PCR技术从载有变形链球菌gtfB基因的质粒中扩增葡聚糖结合区段(GBR)基因片断;将合成的组织纤溶酶原信号肽序列(tPA-SP)连接到GBR基因的上游;再将此基因(sGBR)定向克隆到载有sSBR基因的双启动子真核表达载体pCN-SSIE上,构建出pCN-SSISG;对重组质粒pCN-SSISG进行酶切图谱分析和DNA序列测定。结果:酶切图谱分析显示, PCR扩增的及插入到pCN-SSIE中的目的基因sGBR片断大小与预期相符;DNA序列测定结果确定:重组质粒pCN-SSISG开放性阅读框架和插入的信号肽序列均正确。结论:成功构建出了具有在真核、原核宿主细胞均可表达的双启动子的质粒pCN- SSISG,该质粒转染原核免疫接种载体(譬如减毒沙门氏菌)作为黏膜免疫疫苗会具有强免疫原性。

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9 田亮;刷牙漱口好处多[N];农村医药报(汉);2008年
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