收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

簇毛麦酵母双杂交cDNA文库的构建及Hv-cmpg互作基因的克隆与功能鉴定

李颖波  费菲  黄夏荷  曹爱忠  邢莉萍  王海燕  王慰  祝燕飞  王宗宽  谢旗  王秀娥  
【摘要】:小麦白粉病是中国和世界上许多国家小麦生产中危害日趋严重的病害之一,定位于簇毛麦6V染色体短臂上的抗白粉病基因Pm21目前已经在小麦抗白粉病育种中广泛应用。本实验室在前期研究中,利用大麦基因芯片分析簇毛麦受白粉病菌诱导后的基因表达谱,从中克隆到Pm21的候选基因STPK-V等白粉病抗性相关基因。为了进一步研究簇毛麦白粉病抗性的分子机制,本研究中利用抗白粉病、携带Pm21基因的簇毛麦品系91C43为材料,用南京地区白粉菌混合小种处理后分6个时间段取样,提取总RNA,利用GAL4系统构建了簇毛麦酵母双杂交核系统cDNA文库。统计每平板涂菌量和菌落个数,文库包含50万个以上重组cDNA克隆,文库插入片段大小平均约为1kb,能够覆盖簇毛麦叶片表达的绝大多数基因的cDNA。将pGBKT7-CMPG导入酵母菌株HF7C中作为诱饵,用醋酸锂-聚乙二醇法筛选簇毛麦酵母双杂交cDNA文库。经一对一回转SD-HLT+5mM3AT平板和LacZ验证后,提取质粒测序除去功能重复的片段,筛选与已克隆的抗白粉病相关基因的阳性互作基因。挑选其中互作较强的基因,利用RT-PCR分析它们在白粉菌诱导的簇毛麦叶片中的表达情况,利用荧光双分子互补实验验证这些基因与已克隆的基因间在洋葱细胞核中的互作。构建超量表达载体,利用基因枪介导的转基因技术进行功能互补分析,目前已获得转扬麦158的T0代植株。构建VIGS沉默载体来进行下一步的基因功能鉴定。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 贾岩龙;牛杰;贾俊英;邱乐乐;薛乐勋;;杜氏盐藻GAPDH cDNA的克隆鉴定及其启动子功能表达载体的构建[J];生物技术通报;2011年07期
2 ;研究发现小麦白粉病抗性基因[J];北京农业;2011年20期
3 ;研究发现小麦白粉病抗性基因[J];福建稻麦科技;2011年02期
4 石晓艳;曾彦达;李世龙;王玉波;马凤鸣;刁志伟;;甜菜亚硝酸还原酶(NiR)基因的克隆与表达分析[J];作物学报;2011年08期
5 匡文华;张晓茹;成鹰;杜丽;张冬琳;郝永昌;雷明;焦寒伟;刘涛;祁超;王凤阳;;水牛TLR4 cDNA全长的克隆及其生物信息学分析[J];中国畜牧兽医;2011年07期
6 杨光;;我国发现小麦白粉病抗性基因[J];农药市场信息;2011年15期
7 钱云霞;郑伟贤;宋娟娟;;鲈鱼6-磷酸葡萄糖酶催化亚基(G6PC)cDNA和5'侧翼序列的克隆及分析[J];农业生物技术学报;2011年04期
8 王旭静;徐惠君;佘茂云;贾士荣;王志兴;;主要农作物转基因飘流频率和距离的数据调研与分析Ⅲ.小麦[J];中国农业科技导报;2011年04期
9 赵勤;白罗;傅体华;;小麦新品系2-26中抗白粉病基因的遗传分析和RAPD标记[J];核农学报;2011年04期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李颖波;费菲;黄夏荷;曹爱忠;邢莉萍;王海燕;王慰;祝燕飞;王宗宽;谢旗;王秀娥;;簇毛麦酵母双杂交cDNA文库的构建及Hv-cmpg互作基因的克隆与功能鉴定[A];现代分子植物育种与粮食安全研讨会论文集[C];2011年
2 程汉良;姬南京;彭永兴;申欣;吴陈晨;许建和;董志国;;草鱼乙酰辅酶A羧化酶基因全长cDNA克隆[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
3 李西雷;汪桂玲;李家乐;;三角帆蚌GPX基因cDNA全序列克隆及其结构特征[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
4 李西雷;汪桂玲;李家乐;袁一鸣;;三角帆蚌GPX基因cDNA全序列的克隆及其编码蛋白的结构分析[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
5 ;Constructing cDNA Microarray to Isolate Novel Differentially Expressed Genes Related to Human Glioma and Characterizations of Novel Full-length Gene PPIL-3[A];中国抗癌协会神经肿瘤专业委员会第八届学术会议论文集[C];2011年
6 刘丹丹;李建梅;韩宏晓;王尚尚;曹李琴;许金俊;陶建平;;巨型艾美耳球虫免疫原性相异株间差异表达基因消减cDNA文库的构建与分析[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
7 兰欢;卜友泉;崔涛;汪长东;易发平;刘革力;宋方洲;;肿瘤相关新基因PRR11的全长cDNA克隆及其功能初步解析[A];重庆市生物化学与分子生物学学术会议论文摘要汇编[C];2009年
8 裴宗飞;张文娟;牛钟相;;鸭补体C3d基因cDNA的克隆及鉴定[A];山东畜牧兽医学会禽病学专业委员会第一次学术研讨会论文集[C];2009年
9 郝丽;李和平;严历;;东北梅花鹿鹿茸尖端组织全长cDNA文库的构建[A];2010中国鹿业进展[C];2010年
10 熊梅;穆亚芳;刘家森;原东伟;郭东春;姜骞;林欢;曲连东;;兔肝cDNA文库的构建[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 覃川杰;瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)脂肪代谢相关基因cDNA的克隆及表达分析[D];华东师范大学;2010年
2 慎小晶;蝶蛹金小蜂cDNA文库抗菌肽基因筛选及表达研究[D];浙江大学;2010年
3 姜争;基于cDNA微阵列技术Ⅱ、Ⅲ期肠癌转移相关基因的筛选、鉴定及应用研究[D];复旦大学;2010年
4 徐庆刚;大熊猫Leptin、Ghrelin和IL-15基因的克隆表达及胃和脾脏cDNA文库的构建[D];浙江大学;2009年
5 李锋;转录组学、蛋白质组学研究海州香薷Cu吸收与耐性分子机理及其cDNA文库的构建[D];浙江大学;2009年
6 邓清超;具有高传播能力的栗疫菌低毒力病毒CHV1-CN280的基因组序列测定与可侵染性全长cDNA克隆构建[D];南京农业大学;2009年
7 方强;间日疟原虫全长cDNA文库的构建与PvGDH的克隆表达、表位鉴定及单抗研究[D];苏州大学;2010年
8 葛荣朝;小麦耐盐相关基因cDNA的克隆与功能研究[D];河北师范大学;2005年
9 刘媛;三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)cDNA文库构建、EST分析及抗脂多糖因子研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
10 许亮;应用cDNA阵列技术对肝细胞肝癌基因表达谱的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郝言明;柔嫩艾美耳球虫两个抗药株消减cDNA文库的序列分析[D];福建农林大学;2010年
2 邓效禹;籽鹅垂体组织全长cDNA文库的构建及部分克隆序列分析[D];黑龙江八一农垦大学;2010年
3 李付美;莱芜猪心脏组织cDNA文库的构建及部分表达序列标签的分析[D];曲阜师范大学;2010年
4 杜雯林;苹果褐斑病菌钙调素基因的cDNA克隆以及序列分析[D];西北农林科技大学;2010年
5 战晴晴;柴胡全长cDNA文库和遗传图谱的构建及蚕豆病毒属病毒的鉴定[D];东北林业大学;2010年
6 王金萍;枳根全长cDNA文库的构建及生物信息学研究[D];西南大学;2011年
7 刘磊;TMV侵染烟草基因差异表达的cDNA-AFLP分析[D];黑龙江八一农垦大学;2010年
8 严福祥;乌龟孔雀石绿浸泡后的组织病理学研究及肝脏全长cDNA文库的构建与鉴定[D];暨南大学;2010年
9 杨朝霞;微小牛蜱雌蜱唾液腺消减cDNA文库的构建及卵黄蛋白原基因的原核表达[D];中国农业科学院;2010年
10 谢凯;嗜水气单胞菌诱导的池蝶蚌血细胞cDNA文库的构建及亲环蛋白基因的序列分析[D];南昌大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者陈超;日公开烟草cDNA盐基测序成果[N];科技日报;2003年
2 陆志城;你方唱罢我登场[N];医药经济报;2002年
3 余志平 译;破译癌症的“黑匣子”[N];医药经济报;2002年
4 华夏证券研究所 崇松;生物芯片为何走不出实验室[N];中国经营报;2000年
5 美国Promega公司北京办事处 戴钢;服务新药开发:PROMEGA公司独树一帜[N];中国高新技术产业导报;2002年
6 谢建平 执笔;以促进人类科技创新为准绳[N];医药经济报;2001年
7 魏衍亮;要重视授予专利的形式条件[N];中国医药报;2004年
8 张喜;日本完成1.7万个水稻基因碱基对测序[N];农民日报;2001年
9 何增寿;食管癌相关基因研究获进展[N];中国医药报;2004年
10 陆志城;AIDS研究热点何在?[N];医药经济报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978