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一种高效的小鼠胚胎干细胞分离方法的建立

王晏鹏  陈娟  崔毓桂  刘嘉茵  
【摘要】:目的:建立一种简便、高效的小鼠胚胎干细胞分离方案。方法:以C57BL/6J小鼠3.5天囊胚为材料,比较在含有knockout血清替代品(KSR)的ES细胞培养基内添加碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与否对建系的效率影响,对建立的细胞系进行碱性磷酸酶、核型、多能性相关因子以及分化潜能的检测。结果:使用无bFGF的ES细胞培养基,成功从6个囊胚中分离得到4株ES样细胞系(成功率4/6,66.7%)。而添加10ng/mlbFGF的培养基内未见ES样克隆出现(0/3)。所获得的ES样细胞可长期传代并维持未分化状态,表达碱性磷酸酶及Oct4、Nanog和Sox2等多能性因子,悬浮培养可以形成类胚体,接种到同种小鼠皮下可形成畸胎瘤。结论:在培养液中添加KSR可用于高效建立C57BL/6J小鼠ES细胞系,而bFGF可能不利于小鼠ES细胞系的建立。

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