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重组腺相关病毒(rAAV)基因转移系统进展及其质量研究

高凯  林建伟  饶春明  王军志  
【摘要】:正 [目的] AAV病毒载体因其安全性好、免疫原性弱;可转导分裂细胞和非分裂细胞;物理性质稳定,可整合致宿主染色体,并介导外源基因长期稳定的表达而被公认为是基因治疗中最有应用前景的载体。目前国外已有3家公司运用该载体对CF和血友病B进行基因治疗。国内rAAV载体的工作起步虽晚于国外,但首创了全新的重组AAV生产和纯化系统,将传统的多因素制备系统变成双因素生产系统,突破了AAV大量生产的瓶颈,且AAV介导Ⅸ因子治疗血友病B的研究准备申报临床试验,迫切需要建立质量标准及质控方法。 [方法] 针对AAV的生物学特性及生产所必须的因素,我们初步制定了质量控制计划,主要包括生产细胞及辅助病毒的检定、病毒理化特性、转移基因的生物学活性测定、残余杂质的检定和安全性实验等几部分;由于重组AAV的特殊结构,针对不同片段,分别设计多对引物扩增,并对扩增产物进行检定;通过多种方法检测病毒纯度,其中AAV与腺病毒理化特

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