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基于Cre/LoxP系统的Smad2条件基因剔除小鼠的建立

周江  程萱  孙彦洵  吕娅歆  程静  黄培堂  黄翠芬  杨晓  
【摘要】:正 Smads家族是最新发现的TGF-β信号转导途径中一个重要的新基因家族,它们可以直接将TGF-β信号从细胞膜转移到细胞核内。TGF-β信号分子通过跨膜苏氨酸、丝氨酸激酶受体复合体进行信号转导。SMAD2属于受体激活的SMADs,Smad2的基因位于18q21上,靠近Smad4的基因;此基因包含12个外显子。Smad2在某些散发性肿瘤中,如胰腺癌、结肠癌、肺癌,发生突变,说明它是一种可能的肿瘤抑制基因,纯合Smad2基因剔除小鼠的胚胎在E6.5天死亡。为了进一步研究Smad2在成体各组织器官及肿瘤发生中的可能作用,我们利用Cre-LoxP系统构建了Smad2条件基因剔除载体,将LoxP置于Smad2基因组序列C末端功能域两侧,并在组成型表达Cre重组酶的大肠杆菌中检测了LxoP位点的有效性。 在利用该打靶载体对ES细胞进行电击转化前,首先要制备G418抗性的小鼠胚胎干细胞滋养层用于ES细胞的培养和筛选。我们利用一个neo基因成功整合到基因组的小鼠品系

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