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2-OG对Anabaena PCC 7210转录因子NtcA与启动子结合能力影响的结构分析

赵梦溪  周丛照  
【摘要】:蓝细菌(Anabaena PCC7210)中的NtcA是属于cASP受体蛋白(CAP)家族的一个转录因子。在缺乏有机氮源的时,蓝细菌链中每间隔约10个细胞会有一个细胞分化成为可以固定氮气的异形细胞。异形细胞形成的调控机制为:当缺乏可利用氮源时,蓝细菌三羧酸循环中的α-酮戊二酸(2-OG)脱氢酶的缺乏,使TCA中断,2-OG浓度提高,从而提高NtcA与相应基因的启动子结合,促进其自身和异形细胞分化相关基因的表达,一些与固氮作用和异形细胞分化无关的基因表达则被抑制,使得细胞分化成为可以固定氮气为氮源的异形细胞。有文献推测2-OG之所以能促进NtcA与DNA结合并影响转录起始是由于其与cAMP对CAP家族蛋白的作用机制一样诱导了NtcA的构象改变。我们将NtcA克隆入pET28含组氨酸标签的表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中与分子伴侣共表达。经过亲和层析和和凝胶过滤法纯化得到纯度高于95%的均一性蛋白质,浓缩后在有无2-OG加入的条件下结晶,希望能利用X射线衍射得到晶体数据,通过解析,从结构的角度解释2-OG使NtcA发生了怎样的构象变化,提高了其与DNA的结合能力。现已得到无2-OG条件下的单晶和纯化蛋白与1mM2-OG共混的晶体,并在晶体优化中。

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1 赵梦溪;周丛照;;2-OG对Anabaena PCC 7210转录因子NtcA与启动子结合能力影响的结构分析[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
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