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67kD层粘连蛋白受体促进肝癌侵袭转移分子机制研究

薛会丽  郑大利  黄清玲  
【摘要】:层粘连蛋白是细胞外基质(ECM)重要的成分之一。67 kD层粘连蛋白受体(67LR)是层粘连蛋白的一个非整合素受体,与层粘连蛋白相互作用,调节肿瘤的增殖、粘附、血管形成,促进肿瘤的侵袭转移。本实验室前期发现67LR的高表达可以促进肝癌细胞的侵袭能力,本研究旨在探讨67LR对转移相关基因表达的影响,以阐明67LR促进肝癌侵袭转移的分子机制。采用瞬时转染以及构建稳定细胞株来实现67LR的高表达,采用RNA干扰技术降低67LR的表达,抑制效果采用流式细胞术和半定量RT-PCR检测;运用半定量RT-PCR技术分析67LR对基因表达的影响,部分基因表达的变化通过荧光定量PCR验证;基质金属蛋白酶(MMPs)活性的变化通过明胶酶谱测定。67LR高表达的稳定细胞株LR4,其MMP-2、MMP-9的表达比67LR低表达的LR6及对照组pcDNA-1细胞明显升高,明胶酶谱分析也揭示,LR4细胞分泌的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性明显上升;瞬时转染67LR重组质粒的Huh-7细胞,其MMP-2、MMP-9、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、组织金属蛋白酶抑制剂-4(TIMP-4)、已酰肝素酶(Hpa)、尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)、组织蛋白酶-B(Cath-B)及组织蛋白酶-D(Cath-D)的表达明显升高,而组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)、组织金属蛋白酶抑制剂-3(TIMP-3)的表达明显下降;在SMMC-7721细胞和Huh-7细胞中,67LR表达的下调可以抑制MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-4、Hpa、uPA、Cath-B、Cath-D等基因的表达,而促进TIMP-2、TIMP-3的表达。结果表明,67LR可以通过调节MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4、Hpa、uPA、Cath-B、Cath-D等多个ECM基因的表达,从而促进肝癌的体外侵袭能力。

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