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Bacillus subtilis FS321淀粉酶基因的克隆与表达

施碧红  温建新  吴伟斌  施巧琴  吴松刚  
【摘要】:根据GenBank上B.subtilis的淀粉酶基因的保守序列设计引物,PCR扩增获得1980bp的B.subtilis FS321淀粉酶基因的完整阅读框,命名为BSA(GenBank登陆号为EU195860)。其与GenBank中的一些B.subtilis的α-淀粉酶基因的同源性达97~98%。该基因推导出的氨基酸序列由660个氨基酸组成,该氨基酸序列与GenBank上已报道的其它的一些Bacillus的淀粉酶氨基酸序列建立了系统进化树分析表明其与已报道的一些B.subtilis的α-淀粉酶的同源性可达98%以上,在进化树上走向同一簇。进一步构建pET-28a-BSA重组质粒,转化至E.coli BL21中加IPTG诱导表达,表达的结果经SDS-PAGE检测,发现阳性克隆比阴性对照多呈现一条约75.0KD表达带,与预测的蛋白大小相符。将粗酶液滴加在可溶性淀粉验证板上50℃反应12h后,加入碘液出现无色水解透明圈,表明表达产物具有淀粉酶活性。该重组淀粉酶的最适反应pH值为7.5、最适反应温度为50℃

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