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定量测定轮状病毒滴度的几种方法的优化及细胞系的选择

胡秀华  何苗  
【摘要】:采用优化的病毒蚀斑分析法(PFU)和组织细胞培养半数感染剂量(TCID_(50)) 法。在三种细胞系 MA-104、Caco-2和 Vero 中,对猴轮状病毒标准株 SA-11进行滴度测定。结果表明,胰蛋白酶处理过的 SA-11在 MA-104和 Caco-2细胞中形成较好的病毒空斑,两种细胞形成的空斑数较一致;而 SA-11在 Vero 细胞中很难观察到病毒空斑和细胞病变。确定可利用这两株细胞进行蚀斑分析和病毒的分离鉴定,Vero 细胞不适合作为蚀斑分析的细胞。TCID_(50)实验结果表明,蚀斑分析法与 TCID_(50)法的敏感性相同,按照波松分布规律, 即1个 PFU=1.44个 TCID_(50)。同时,利用 PCR 技术对产生了蚀斑的细胞进行 cDNA 的扩增。结果表明,所扩增的片段是猴轮状病毒标准株SA-11的 VP7基因序列,直接证明蚀斑分析法和 TCID_(50)法的特异性。

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