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一种人工限制性内切酶的设计与表达

刘娟  刘威  李艳军  
【摘要】:Cys2-His2型锌指结构域可以识别结合靶DNA序列,通过融合其它的功能结构域使其在目的DNA上行使相应的功能,因此用设计的多锌指可以构建融合蛋白作为转录激活因子、转录抑制因子、或限制性内切酶。其中,人工限制性内切酶是人为设计的一种对特异性的DNA序列有识别和切割作用的核酸酶。它的获得通常是把DNA识别、结合结构域与限制性内切酶Fok I的切割结构域(FN)相连而成的融合蛋白。设计了一种人工限制性内切酶,包括两个结构域,一个是识别结构域,由3个锌指构成,特异性结合HIV-1 5′端前导序列中的一段保守序列,即5′-CTGTGTTTG-3′序列,另一个是来自限制性内切酶FokI的切割结构域,两个结构域之间通过(Gly4-Ser)3连接区相连接。化学合成基因,用pET-22b(+)构建表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。表达产物经纯化后进行活性鉴定,表明在体外可以特异性地切割靶序列。

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