【摘要】：目的制备携带有人源DPP4基因(hDPP4)的转基因小鼠,为中东呼吸综合征(Middle East Respiratory Syndrome.MERS)冠状病毒疫苗的研制和治病机制分析工作提供小动物模型。方法首先从体外培养的人类细胞系中克隆HDPP4 cDNA序列,将其插入表达载体后构建重组质粒。随后利用原核注射法制备HDPP4转基因小鼠,繁育出F_0代转基因小鼠。选取整合有HDPP4基因的F_0代鼠与野生型鼠杂交繁殖获得F_1代小鼠。PCR鉴定F_1代转基因小鼠基因型,同时用RT-PCR和Western blotting方法检测HDPP4在转基因小鼠全身组织表达情况。结果共得到F_0鼠4只。F_1代转基因小鼠经Western blotting和RT-PCR检测,HDPP4表达水平在心、肝、脾、肺、脑等组织中表达中均明显增高。结论成功构建HDPP4基因小鼠,并且能够稳定遗传。为后续的MERS疫苗评价相关工作奠定了基础。
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