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猪塞内卡病毒病灭活疫苗(HN2017株,悬浮培养)研究

王淑娟  班付国  马震原  赵雪丽  柴茂  杨海波  刘影  闫若潜  
【摘要】:目的意义:猪塞内卡病毒病是由塞内卡病毒A (Senecavirus A,SVA)引起的一种猪的传染性疾病,可引起仔猪、育肥猪、经产母猪和公猪鼻、唇部、蹄部、腹部、背部等部位出现水泡、脓包、溃疡等,病猪死亡率可达30%~70%。2016年至今,SVA先后在我国福建、广州、河南等12个省份引发病例,其表现的临床症状、危害程度等呈现愈来愈严重的趋势。但截止目前,全球尚无商品化的预防猪塞内卡病毒病的疫苗可用,因此,研发猪塞内卡病毒病灭活疫苗对预防该病的发生、保障畜牧业健康发展具有重大意义。材料与方法:本研究自临床上发生SVA的发病动物的水泡中分离病毒,经细胞传代培养,RT-PCR、FQ-PCR、间接免疫荧光(IFA)、蚀斑纯化、病毒透射电镜、测序分析等对病毒进行鉴定;优化了病毒的悬浮培养工艺;确定了最佳的灭活条件及最优佐剂;将制备的疫苗进行主动免疫和被动免疫的安全性试验、免疫攻毒保护及持续期试验;确定了疫苗的保存期。结果与讨论:成功分离到了1株高效价的SVA,病毒含量不低于1×10~9.OTCID50/mL,该毒株已在中国菌毒种保藏中心进行了保藏(保藏号:V201767);优化的无血清悬浮培养工艺,生产的病毒效价远高于传统的转瓶培养工艺以及现有国内外文献报道,所制备的疫苗中不含血清,大大降低了对猪体的应激反应等不良反应;对病毒的灭活操作简单、时间短、灭活效果好;制苗用佐剂为双相佐剂,制备的疫苗黏度低,通针性良好,便于临床应用,疫苗的乳化工艺简单,成品疫苗外观为乳白色或淡粉红色乳剂,水包油包水剂型;免疫途径为经颈部肌肉接种疫苗;主动免疫产生有效抗体的时间早,抗体效价高于现有文献报道,疫苗的有效抗体持续时间不低于6个月,被动免疫有效抗体持续期不低于1个月;该疫苗对目前流行毒株有良好的保护作用,对其他田间流行毒株有良好的交叉攻毒保护;疫苗的保存期不低于18个月。

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