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人巨噬细胞极化相关长链非编码RNA表达谱筛选及研究

姚芳苡  黄自坤  傅颖媛  
【摘要】:目的:利用高通量长链非编码RNA芯片检测不同极化类型人巨噬细胞中lncRNA与mRNA表达谱变化,初步探讨lncRNA核富集转录本1(NEAT1)对巨噬细胞极化的影响。方法:1.利用高通量Arraystar human lncRNA芯片比较未极化巨噬细胞(M0)、M1和M2之间lncRNA和mRNA表达谱差异。2.采用RT-PCR检测lncRNA NEAT1在M1/M2重极化过程中的表达变化。3.采用ELISA检测IL-12及IL-10的分泌量;RT-PCR检测M1、M2巨噬细胞相关分子表达。将NEAT1siRNA转染M1型巨噬细胞,检测其对M1极化表型的影响。结果:1.芯片结果显示不同极化类型巨噬细胞间lncRNA和mRNA表达差异显著2.GO分析发现巨噬细胞极化过程中差异表达的mRNA主要与免疫应答、免疫系统进程、防御反应、固有免疫应答、趋化因子活性、细胞因子活性、细胞外间隙、细胞膜等方面有关联。Pathway分析发现这些差异表达的mRNA参与细胞因子间相互作用、TNF信号通路、趋化因子信号通路、NK-κB信号通路、NOD信号通路、MAPK信号通路、脂肪酸代谢、PPAR信号通路、癌症通路等。RT-PCR验证结果与芯片检测结果一致。3.M1型巨噬细胞的lncRNA NEAT1表达水平显著高于未极化细胞和M2型巨噬细胞。M1向M2极化转换过程中lncRNANEAT1表达逐渐降低;而M2向M1极化转换过程中lncRNANEAT1表达逐渐升高。4.NEAT1 siRNA转染巨噬细胞后,经IFN-γ及LPS诱导的M1型巨噬细胞中IL-12分泌降低,CXCL10和CXCL11 mRNA表达水平下降;而经IL-4诱导的M2巨噬细胞中IL-10分泌增加,CCL17和CCL18 mRNA表达升高。此外,NEAT1 siRNA转染M1型巨噬细胞后,M1型巨噬细胞中IL-12分泌降低,IL-10分泌增加,其特点向M2样巨噬细胞转换。结论:利用高通量检测显示异常表达mRNA可能在巨噬细胞极化过程中发挥作用。IncRNA NEAT1在M1巨噬细胞中高表达,参与调控巨噬细胞极化,干扰1ncRNA NEAT1表达可有效抑制M1型巨噬细胞极化,并可诱导M1型巨噬细胞重极化为M2型。

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