重组人粒／巨噬细胞集落刺激因子下游处理研究(Ⅰ)

【摘要】：目的在成功构建人粒／巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)高效表达克隆的基础上,对表达产物进行实验室规模和中试规模的分离、纯化及对rhGM-CSF在溶液中的稳定性进行研究。方法应用工程菌发酵、超声破菌、包涵体抽提、凝胶过滤层析、复性、离子交换等方法对rhGM-CSF进行纯化,并用GM-CSF依赖株,IF-1细胞MTT法测定其生物学活性及应用透析法测定其在溶液中的稳定性。结果终产物纯度达 99％,比活性达1．5×107u／mg蛋白。在偏硷性溶液中会发生降解,但降解后生物活性未见明显下降。结论采用分子筛色谱和阴离子交换色谱对GM-CSF进行纯化,经从实验室规模放大至中试规模证明该工艺是简便可行的,得到了高纯度、高比活性的纯品。