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中国人(山东地区)HLA-DPB1基因单核苷酸多态性的初步研究

克丙申  张胜兰  邢万佳  黄象艳  周仲玲  徐军  齐发莲  
【摘要】:目的研究中国人的HLA-DPB1基因,为建立适合中国人的HLA-SBT基因定型方法做技术准备。方法使用第十一届国际组织相容性会议提供的HLA-DPB1引物序列,由PCR技术扩增HLA-DPB1基因第二外显子。产物纯化后,直接核酸序列分析确定个体的HLA-DPB1外显子核酸序列。与由国际上公布的HLA-DPB1核酸序列比较,确定多态性位点。结果研究结果提示中国人HLA-DPB1第二外显子基因序列与国际上公布的序列基本一致,但有不同之处,多处存在单核苷酸多态性(SNP),提示存在有新的等位基因。对51例个体研究显示,出现频率最高的等位基因是DPB1~*02012。讨论由于HLA(human leucocyte antigen)与人的多种疾病的发生、发展、器官移植的存活等高度相关,该领域的研究是国际上的热点之一。尽管由于技术及其它方面的原因,目前HLA-DPB1基因分型尚未直接用于临床,但到1998年国际上已经公布了83种HLA-DPB1等位基因的核酸序列资料,1999年底,国际上已经公布了93种HLA-DPB1等位基因的核酸序列资料。这些序列资料大部分来自高加索人,中国人HLA基因的研究较薄弱,与国外同类研究相比较,有关的核酸序列资料几乎没有。HLA-DPB1的核酸序列资料亦未见报道。我们使用第十一届国际组织相容性会议提供的HLA-DPB1引物序列,用PCR技术获得了一些山东籍个体的HLA-DPB1第二外显子基因片段,经核酸序列分析获得了一些序列资料。分析了个体等位基因型。虽然这些标本多数来自糖尿病患者,不能正确代表全部的中国人的HLA-DPB1基因信息,但可略见一斑。初步反映出中国人群中可能具有一些新的等位基因,或者是新的单核苷酸多态性位点。本文使用了PCR产物直接核酸序列分析技术,部分PCR产物使用了双向测序方法,尽管PCR方法产生的模板中,会有少数片段中存在有错误硷基,但是由于错误硷基数量很少,使用PCR产物直接核酸序列分析时,不能发现这样的错误。但使用克隆技术测序量,必须注意这一问题。使用SNP标记来描述HLA基因的高度多态性,会成为描述高度多态性的HLA基因的一种新方法。本研究提示中国人群中可能存在一些新的等位基因,这些新的等位基因有待进一步研究确定。

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