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Wnt/β-catenin信号通路对外泌体介导根尖牙乳头干细胞成牙本质向分化作用的研究

叶雨阳  邹晓英  王晓燕  岳林  
【摘要】:目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路在外泌体介导根尖牙乳头干细胞成牙本质向分化中的作用,为牙髓牙本质再生研究提供实验依据。方法:酶消化法分离培养牙髓干细胞(DPSCs)、根尖牙乳头干细胞(SCAP),多步离心法提取DPSCs和DPSCs-OD(成牙本质向分化)外泌体及鉴定。采用FH535抑制Wnt/β-catenin信号通路,检测SCAP的Wnt/β-catenin信号通路标志基因β-catenin、LEF-1及其蛋白的表达变化。在培养液中分别添加外泌体DPSCs-Exo和DPSCsOD-Exo,采用Real-time PCR和Western blot技术检测SCAP的Wnt/β-catenin信号通路标志基因AXIN2、β-catenin和LEF-1及其蛋白的表达变化。在外泌体作用基础上,加入抑制剂FH535,分析SCAP成牙本质向分化标志基因DSPP、DMP-1、OCN、COL-1及其蛋白的表达变化。结果:DPSCs-Exo和DPSCs-ODExo均符合外泌体特征。DPSCs-OD-Exo的粒径峰值稍大。抑制剂FH535可在第2和4天显著抑制SCAP细胞Wnt/β-catenin信号通路基因β-catenin、LEF-1的基因和蛋白的表达。添加外泌体OD-Exo组的SCAP细胞AXIN2基因表达呈下降趋势。第14天时,OD-Exo组的β-catenin和LEF-1基因表达上调。蛋白表达趋势与Real-time PCR结果基本一致。添加外泌体后,Exo组和OD-Exo组的SCAP细胞成牙本质标志基因DSPP、DMP-1、OCN、COL-1在第2天、4天和7天表达上调,加入抑制剂后Exo-FH535组和OD-Exo-FH535的成牙本质标志基因表达量均显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。第14天时,添加抑制剂的Exo-FH535组和OD-Exo-FH535组的成牙本质标志基因表达量反而出现升高。蛋白表达趋势与Real-time PCR结果基本一致。结论:在外泌体对SCAP成牙本质向分化机制中,Wnt/β-catenin信号通路的介导作用可能是其重要途径之一。

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