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β-catenin表达水平对牙囊细胞成骨/成牙骨质向分化的影响

杜宇  刘燕  张新春  凌均棨  
【摘要】:目的:观察调控β-catenin表达水平对大鼠牙囊细胞增殖和成骨/成牙骨质向分化的影响。方法:分别构建荧光慢病毒载体pSIN-EF2-IRES-GFP-puro介导的β-catenin过表达牙囊细胞和pshRNAcopGFP-puro载体介导的β-catenirt稳定干扰牙囊细胞,CCK8法检测1d、2d、3d、4d、5d、6d和7d的细胞增殖;WB检测0d、7d、14d和21d时转染细胞β-catenin、OCN、RUNX2和Ⅰ型胶原的表达;茜素红染色观察矿化诱导液孵育2w后转染细胞的矿化能力。结果:利用两种荧光慢病毒载体可成功构建β-catenin过表达和β-catenin-shRNA牙囊细胞。CCK8实验表明,在10%DMEM培养条件下,β-catenin过表达牙囊细胞、β-catenin-shRNA牙囊细胞和对照组牙囊细胞增殖曲线无明显差异。WB分析显示,在培养0d、7d、14d、21d,β-catenin过表达牙囊细胞的β-catenin蛋白表达均比对照组细胞升高(P0.05),且RUNX2、OCN、和Col-Ⅰ的表达几乎均比对照组明显提高(P0.05);β-catenin-shRNA牙囊细胞的β-catenin蛋白表达均比对照组低,RUNX2、OCN、和Col-Ⅰ的表达明显下降(P0.05)。茜素红染色显示β-catenin过表达牙囊细胞矿化能力增强,β-catenin-shRNA牙囊细胞矿化能力下降。结论:牙囊细胞的β-catenin稳定过表达和敲除对增殖无明显影响,但β-catenin表达水平和牙囊细胞的成骨/成牙骨质向分化能力正相关。

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