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人牙髓细胞体外培养传代过程中的老化表现

庄姮  邹晓英  高学军  岳林  
【摘要】:目的:观察人牙髓细胞在体外正常传代培养过程中的老化趋势,评价其在细胞、代谢酶、基因三个水平的老化表现。方法:收集临床上12~16岁患者符合要求因正畸减数拔除的前磨牙或18~25岁患者因阻生拔除的第三磨牙,体外培养原代细胞和传代细胞。选取其中第4代、笫8代、第10代和笫15代,共计4个时点动态观察细胞形态、增殖能力;检测碱性磷酸酶活性和老化相关β-半乳糖苷酶活性;检测相关基因表达水平。结果:人牙髓细胞体外培养传代过程中,从第15代显现出细胞水平的老化特征:细胞增殖缓慢,培养至第4天,细胞仅达到30%~40%汇合。高倍镜下观察细胞胞体增大,细胞形状扁平,胞浆区域增大,细胞浆/细胞核的比例增加,细胞形态除了梭形、多边形外,可见较多的不规则形细胞。随着细胞代数增加,细胞增殖能力逐渐下降,至第1 5代时细胞增殖曲线极平缓,增殖停滞。第10、15代细胞的碱性磷酸酶阳性染色明显减少,着色浅,活性显著降低。第15代细胞出现β-半乳糖苷酶染色阳性细胞。随着细胞代数增加,p53基因的表达逐渐升高,表达水平为第15代第8代第4代。结论:人牙髓细胞体外培养传代过程中,随着代数增加,细胞逐渐老化,至第1 5代时在细胞、代谢酶、基因三个水平均呈老化表现,表明细胞从机能下降逐渐步入老化状态。

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