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改良组织块酶消化法培养人龋坏牙髓干细胞的实验研究

麻丹丹  高杰  吴补领  
【摘要】:目的:比较三种方法培养的人龋坏牙髓干细胞的成功率及细胞生长状态,以探求人龋坏牙髓干细胞的最佳培养方法。方法:取18-22岁成人新鲜正常和龋坏离体第三磨牙各25颗,采用组织块法、酶消化法、改良组织块酶消化法进行牙髓干细胞的培养。通过倒置显微镜观察组织块的贴壁,以及细胞的形态和数量,并记录培养所需时间;有限稀释法纯化牙髓干细胞,流式细胞仪检测正常和龋坏牙髓干细胞表面标记物Stro-1、CD90的表达情况,绘制正常和龋坏牙髓干细胞生长曲线。结果:组织块法、酶消化法及改良组织块酶消化法均可以培养出人龋坏牙髓干细胞。改良组织块酶消化法可以在短时间内获得数量多,状态好,形态多样的细胞。通过有限稀释法获得的龋坏牙髓干细胞生长速率低于正常牙髓干细胞(P0.05)。结论:改良组织块酶消化法是一种较为理想的原代培养方法,人龋坏牙髓干细胞的体外成功培养为探究牙齿受到磨损、龋坏等慢性刺激时第三期牙本质的形成机制提供了实验基础。

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