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体外合成变形链球菌AI-2的活性检测与LuxS酶相互作用蛋白的筛选

张鹰  文玲英  孙力  储冰峰  
【摘要】:目的:利用分子生物学的相关技术体外合成具有良好生物学活性的Al-2信号分子,筛选与LuxS相互作用的蛋白质,为进一步研究LuxS/Al-2在变链菌和口腔生物膜的致病性、耐药性的调节机制奠定基础。方法:利用纯化表达的LuxS蛋白和Pfs蛋白体外合成Al-2信号分子,利用V.harveyi BB170作为报告菌株,通过生物发光效应检测体外合成的变形链球菌Al-2信号分子的生物活性,并间接检测LuxS蛋白和Pfs蛋白的生物学活性。根据Ni-NTA His Bind镍柱对His标签的吸附作用进行His Pull-down,筛选与LuxS相互作用的蛋白质。结果:体外合成的Al-2与变形链球菌菌液中Al-2均可诱导V.harveyi BB170发光,且体外合成Al-2诱导效果强于菌液;His-LuxS与变形链球菌菌体总蛋白进行pull-down结果显示在分子量标准31 kDa-43kDa之间存在多个能与LuxS相互作用的蛋白条带。结论:体外合成的Al-2具有良好的生物学活性,变形链球菌菌体总蛋白中存在多个能与LuxS相互作用的蛋白。

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