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成纤维细胞生长因子促进人骨髓间充质干细胞成骨和成软骨分化的实验研究

郑有华  张志光  苏凯  匡世军  
【摘要】:正目的:探讨成纤维细胞生长因子(bFGF)转染的人骨髓间充质干细胞(BMSCs)构建组织工程化髁突的可行性。材料和方法:从自愿者髂嵴穿刺收取骨髓,以梯度离心分离法和贴壁培养法培养BMSCs,采用脂质体(Lipofectamine 2000)法将bFGF质粒(pcDNA3.1-bFGF)转染到第三代BMSCs,real-time PCR检测转染后bFGF基因的表达、MTT法检测细胞的增殖情况、流式细胞仪细胞周期和增殖;将转染bFGF基因的BMSCs接种于珊瑚骨表面,通过扫描电镜和MTT法观察细胞在珊瑚骨表面的生长和增殖状况;然后将转染bFGF基因的BMSCs分别向成骨和成软骨诱导分化培养,再接种于髁突形状的珊瑚骨表面,植入裸鼠背部皮下,通过大体观察、X线检查、组织病理和免疫组化检查体内成骨和成软骨情况。结果:转染bFGF基因的BMSCs高表达bFGF基因,并可促进BMSCs增殖和成骨分化;能在珊瑚骨表面黏附、生长和增殖;裸鼠体内植入后,能形成骨和软骨组织、并能促进周围血管的增生,表达Ⅰ型、Ⅱ型胶原和bFGF蛋白,但所形成的骨和软骨组织为散在分布,并没有看到正常关节的骨软骨结构。结论:单一来源的BMSCs可以在体内形成骨和软骨组织,bFGF基因转染的BMSCs复合珊瑚骨构建组织工程化髁突是可行的,但目前所构建的仅为散在分布的新骨和软骨的不完整组织,仍需进一步努力以构建具有正常骨和软骨结构的组织工程化髁突。

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