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一氧化氮对人牙周膜细胞增殖抑制作用的研究

刘士有  白红敏  
【摘要】:目的:观察外源性一氧化氮(Nitric Oxide,NO)对体外培养的人牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)增殖的抑制作用,以探索如何获得更多的人牙周膜细胞以满足临床和实验的需要。方法:取口腔临床上12-18岁因正畸拔除的牙周健康、无龋的新鲜前磨牙,刮取根中1/3牙周组织,用组织块贴壁法培养人牙周膜细胞,将培养增殖的4-8代细胞分为两组,即实验组和对照组,接种于96孔板,共200孔。实验组中加入不同浓度的硝普钠(Sodium Nitroprusside,SNP)作为NO的供体,对照组不加SNP。实验组中加入的SNP浓度为100μmol/L、150μmol/L、200μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L、2000μmol/L。培养24h后用硝酸还原酶法检测细胞上清液中NO的含量;MTT检测活细胞数量,连续监测法检测碱性磷酸酶活性。弃掉原培养基,用无SNP的单纯培养基继续培养24h后进行MTT检测。结果:组织块法培养人周膜细胞约7-10天即可见细胞爬出,呈长梭形,类似成纤维细胞。24h后细胞上清液中NO含量随SNP浓度增高而增加;碱性磷酸酶活性随SNP浓度增加而降低;MTT实验显示经SNP作用后的的活细胞数明显较对照组少(P0.05);去除SNP作用后牙周膜细胞仍能保持旺盛的增殖能力,且实验组不同浓度之间无明显差异(P0.05)。结论:NO对培养状态下PDLCs的增殖有抑制作用,且抑制作用在一定情况下可逆转。

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