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防龋基因疫苗pVAX1-GC免疫SD大鼠的实验研究

王伟  刘建国  亓鹏  姜晶  田源  白朋元  管晓燕  
【摘要】:目的:观察基因疫苗pVAX1-GC经不同途径免疫SD大鼠后特异性抗体水平和降低SD大鼠龋齿的程度及疫苗免疫后对动物的安全性影响。方法:①40只出生18天的SD大鼠,雄性,建立龋齿模型后随机分为5组,每组8只,分别为:A组(阴性对照组):用空载体质粒pVAX1股四头肌注射免疫动物。B组(空白对照组):用生理盐水鼻腔滴注免疫动物。C组:质粒pVAX1-GC双侧颌下腺区皮下注射免疫动物。D组:质粒pVAX1-GC鼻腔滴注免疫动物。E组:质粒pVAX1-GC股四头肌注射免疫动物。②免疫时间、免疫剂量和样本采集:共免疫3次,每周免疫一次,连续免疫3周。每次每只小鼠免疫剂量为100μg。③分别于免疫前(即0周)和免疫后第1、2、3、4、5、6W(即鼠龄28、35、42、49、56、63、70d)取血清和唾液样本。鼠龄70天时,处死动物,并取上下颌骨,进行龋齿计分。④血清中IgG和唾液中S-IgA采用酶联免疫吸附实验(间接ELISA法)检测。⑤动物一般安全性的检验:每周称量各组动物的体重,并于实验结束后处死动物,取心、肝、脾、肺、肾进行病理学检查,观察实验组与对照组各器官大体形态及其组织结构有无异常变化。结果:①三种途径免疫SD大鼠后,在动物唾液和血清中均可检测到特异性抗葡糖基转移酶抗体,大鼠患龋水平明显降低,与对照组比较有明显差异(P0.05)。②双侧颌下腺区皮下注射途径免疫动物诱导的唾液特异性S-IgA抗体水平最高。③免疫前后动物体重对照组和实验组之间无明显的差异(P0.05)。SD大鼠的重要脏器经大体观察均未发现明显异常。结论:①防龋基因疫苗pVAX1-GC能有效诱导SD大鼠血液与唾液中特异性抗体的产生,可以抑制大鼠龋齿的发生。②双侧颌下腺区皮下注射免疫有望成为防龋基因疫苗pVAX1-GC的最有效免疫途径。③重组质粒pVAX1-GC免疫动物后,未见对动物体重和重要脏器有明显影响。

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