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小型猪乳牙牙髓干细胞体外分离培养和鉴定

郑颖  王松灵  
【摘要】:目的:体外分离培养小型猪乳牙牙髓干细胞,并对其进行生物学鉴定。方法:采用有限稀释法进行小型猪乳牙牙髓细胞克隆筛选,获得单细胞克隆来源细胞,检测其克隆形成率,并采用免疫组织化学染色及体外诱导牙髓干细胞向脂肪细胞、神经细胞分化,成骨细胞分化,观察其生物学特性。结果:1)克隆化分离培养的小型猪乳牙牙髓干细胞呈集落状生长,增殖快,克隆形成率为0.76%。2)细胞表型组化鉴定波形丝蛋白、Ⅰ型胶原阳性,间充质干细胞表面标志Stro-1染色阳性,神经干细胞特异性标志nestin和神经元发育早期的标志β-tubulinⅢ染色阳性。角蛋白染色阴性。3)在含有15%胎牛血清、地塞米松、β甘油磷酸钠和维生素C的培养液诱导3周;Von-kossa染色呈现高密度黑色阳性反应区域,ALP表达明显。4)经IBMX、胰岛素、消炎痛和氢化可的松诱导3周后,可分化为脂肪细胞,经油红染色可见橙红色阳性颗粒。5)小型猪乳牙牙髓干细胞扩增后向神经细胞诱导分化,诱导后免疫荧光鉴定β-tubulinⅢ表达阳性,Stro-1表达阴性。结论:克隆化分离培养的小型猪乳牙牙髓干细胞具有很强的克隆形成能力,具有间充质干细胞表型和多向分化潜能。

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