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枯草芽孢杆菌耐盐突变株proA全基因克隆及proBA基因渗透压调节功能研究

刘瑞杰  曹军卫  苗丽霞  
【摘要】:利用TaKaRa LA PCR~(TM)试剂盒扩增枯草芽孢杆菌93151耐盐突变株proA基因的未知下游序列。根据测序结果,设计引物,克隆出发菌株和突变株全长proBA基因。序列分析表明,突变株proA基因有三个碱基发生了突变(从起始密码子ATG开始,A~(448)→G,G~(1223)→A,A~(1235)→G),分别导致了三个氨基酸的变化(Thr~(150)→Ala,Arg~(408)→Lys,Gln~(412)→Arg)。将出发菌株和突变株的proBA基因分别转化大肠杆菌JM83(proBA),均能够与其功能互补。SDS-PAGE分析其表达产物,有两条分子量分别约为40kD(ProB)和45kD(ProA)的新蛋白带出现。测定四种转化子(分别含有出发菌株和突变株proB基因的大肠杆菌1.1252转化子及proBA基因的大肠杆菌JM83转化子)的耐盐能力。发现含有突变株proB和proBA基因转化子的耐盐能力,均比相应的含有出发菌株proB或proBA基因的转化子要高,说明proB基因的突变与耐高渗胁迫能力的提高直接相关。另外含有出发菌株和突变株的proBA基因转化子的耐盐能力,也均比相应的仅含proB基因的转化子要高,表明枯草芽孢杆菌的Pr0A比大肠杆菌的ProA更加有效。测定JM83转化子胞内自由脯氨酸,发现其含量随盐浓度的上升而提高,但含突变菌株proBA基因转化子的提高更为显著,说明其耐渗透压胁迫能力的提高与胞内自由脯氨酸的积累密切相关。

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