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鸡源鲍氏志贺菌16S rRNA基因序列测定及同源性比较

杨霞  张红英  夏平安  王川庆  
【摘要】:目的建立鸡源志贺菌的16S rDNA序列分析方法从而进一步从基因水平鉴定鸡源鲍氏志贺菌。方法按照宝生物工程技术服务有限公司提供操作手册用细菌基因组DNA小量纯化试剂盒(TaKaRa MiniBEST Bacterial Genomic DNA Extraction Kit Ver.2.0)提取模板DNA,用PCR扩增出鸡源鲍氏志贺菌16S rRNA 的部分基因(16S rDNA),将纯化PCR产物与PCR产物克隆用Vector(pMD18-T Vector)进行连接,将连接产物转化至JM109感受态细胞中,在含有X-gal、IPTG、 Amp的LB琼脂平板上形成单菌落。记数白色、蓝色菌落.挑选白色菌落用PCR方法确认T载体中插入片段的长度。用含目的片段的T载体质粒做模板, 以M13 Primers做测序引物,在ABI 377 DNA自动测序仪上测序(大连宝生物工程技术服务有限公司完成)。用DNA分析软件将所获得的序列与GenBank的人志贺菌序列相比较,并用序列计算种间相似性,构建志贺菌菌株的系统发育树。结果研究发现鸡源志贺菌的16S rDNA序列在GenBank序列检索中无完全一致的匹配序列,而与已知的人鲍氏志贺菌(X96965)同源关系最近,同源率达99.7%,与人福氏志贺菌(X-80679)的同源率为96.0%;用该分离株的16S rDNA序列与人志贺菌16S rDNA序列构建的系统发育树提示,该菌株是与人志贺菌密切相关的新种或是它们的亚种。结论 16S rDNA序列分析鉴定志贺菌是一种快速、可靠、成本较低的方法。

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