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RKIP过表达对肝癌细胞生物学特性的影响

吴晓慧  王士杰  王顺祥  杨永江  李建坤  唐瑞峰  彭利  
【摘要】:目的:探讨Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡及细胞周期等生物学特性的影响。方法:RT-PCR和western-blot方法对BEL7402、HepG2、HCCLM3和SMMC7721四种人肝癌细胞株进行检测,筛选出RKIP低表达肝癌细胞株,行RKIP质粒转染,G418筛选后,经RT-PCR和western-blot方法鉴定,获得稳定转染空载体和表达RKIP蛋白的细胞克隆。通过MTT法绘制细胞生长曲线,观察肝癌细胞增殖的变化;流式细胞术(FCM)观察细胞周期和凋亡率的变化;Matrigel侵袭实验检测肝癌细胞侵袭力的变化。结果:HCCLM3肝癌细胞RKIP mRNA和蛋白表达水平均显著低于其它三株(P0.05);RKIP转染组HCCLM3细胞中RKIP mRNA和蛋白的表达显著高于对照组(P0.05);根据MTT结果绘制细胞生长曲线,结果示:从第3天开始,RKIP转染组细胞生长显著慢于对照组(P0.05);侵袭实验结果显示对照组和RKIP转染组HCCLM3细胞发生侵袭的细胞个数分别为:101±12和67±14,转染组侵袭细胞数显著低于对照组(P0.05),RKIP对HCCLM3肝癌细胞侵袭力抑制率为33.7%;与对照组比较,RKIP转染组HCCLM3肝癌细胞的细胞周期和凋亡率无显著改变(P0.05)。结论:RKIP的低表达可能与肝癌细胞的侵袭、转移等恶性行为有关,RKIP表达能抑制HCCLM3肝癌细胞的体外增殖能力和侵袭力。

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