微囊藻毒素LR对大鼠肝细胞p53、Bcl-2和Bax表达的影响

【摘要】：目的:微囊藻毒素是一类具生物活性的单环七肽,是蓝藻的一些属产生的次生代谢产物,在发生水华的水体中这类毒素普遍存在。流行病学调查发现人群原发性肝癌、大肠癌发病率与饮水源中的微囊藻毒素有关。微囊藻毒素LR是微囊藻毒素中最常见的一种,由于它们的高急性毒性、强促癌活性以及与人类癌症发生的相关性使其受到全球的关注。近年来已有不少研究报道了p53、Bcl-2和Bax蛋白在细胞凋亡中所起的作用,而在微囊藻毒素引起的细胞凋亡中p53、Bcl-2和Bax蛋白的作用较少有人报道。因此本实验拟研究离体情况下微囊藻毒素LR暴露对大鼠肝细胞p53、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,这对进一步阐明微囊藻毒素的毒作用机理将会有很重要的意义。方法:BRL-3A细胞按5×10~5cell/mL的密度接种于六孔板上,在实验开始0、4、6和7h时分别加入微囊藻毒素LR至终浓度为0、10、100和1000nmol/L,每孔只加一次,最后在8h时将细胞消化,细胞裂解提取蛋白后进行p53、Bcl-2和Bax的Western Blot分析。结果:BRL-3A暴露于不同浓度微囊藻毒素LR后,与对照组相比,10、100、1000nmol/L微囊藻毒素LR在1、2、4、8h暴露后都可以引起BRL-3A细胞p53蛋白表达升高(p0.05)。低浓度组(10nmol/L)随着暴露时间的延长,p53蛋白表达逐渐升高,而中浓度组(100nmol/L)和高浓度组(1000nmol/L)在1h都比2h时略高,2h以后随着暴露时间的延长,p53蛋白表达呈升高的趋势。与p53结果相一致,在低浓度组(10nmol/L),Bax随着暴露时间的延长表达也逐渐升高,而Bcl-2随着暴露时间的延长表达也逐渐降低。在中浓度组(100nmol/L)和高浓度组(1000nmol/L)LR暴露2h以后Bcl-2的表达继续降低并不明显,而Bax在LR暴露2h后中浓度组(100nmol/L)的表达逐渐升高。结论:大鼠BRL-3A细胞暴露于不同浓度微囊藻毒素LR后中p53和Bax表达升高,同时Bcl-2表达下降,表明微囊藻毒素LR可能通过影响细胞凋亡而发挥毒性作用,这对于阐明微囊藻毒素的毒作用机理将会有很重要的意义。