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人工microRNA干扰At3A06基因增强了拟南芥对菌核病的敏感性

黄军艳  许李明  张学江  刘胜毅  
【摘要】:核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)属于子囊菌亚门(Ascomycotina),核盘菌属(Sclerotinia fuck),可导致400多个植物种或亚种发生菌核病,该病是粮油作物、蔬菜等农作物上分布最广、为害最严重的病害之一,尤其在油菜上,严重地影响其产量和品质。基于甘蓝型油菜抗菌核病相关基因芯片表达谱分析结果,油菜基因Bn3A06受菌核病诱导后特异上调表达,序列比对表明该基因与拟南芥基因At3A06高度同源,一致性达85%,但功能未知。本研究利用拟南芥At3A06基因的序列设计并构建了新兴的人工微RNA(artificial microRNA,amiRNA)干扰载体,该载体包含一个抗除草剂草胺磷的基因bar。利用农杆菌介导的花序浸染方法转化拟南芥,经除草剂草胺磷筛选获得3株T1代转基因株系,PCR检测均为阳性。荧光定量PCR检测表明,与野生型Col-0相比,3个转基因株系中At3A06基因的相对表达量分别下降至0.27、0.24、0.31,表明At3A06基因的表达受到了显著干扰(P0.05),且3个株系中At3A06基因的表达被抑制的程度十分接近。对3个转基因株系的T2代植株进行菌核病抗性鉴定,结果显示,转基因植株对菌核病的敏感性均显著增强(P0.05)。因此推测,At3A06基因可能参与了植物的防御反应,与植株对核盘菌抗性密切相关,对其作用机制的研究正在进行中。

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