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重组腺病毒表达siRNA抑制SARS病毒基因的研究

张雪  邬开朗  乐鑫  朱应  吴建国  
【摘要】:急性呼吸系统综合症(SARS)是由一种新的冠状病毒(SARS-CoV)导致的感染性很强、致死率极高的疾病,而且到目前为止并没有有效的治疗方法。为了研究防治 SARS病毒感染的新方法,我们构建了表达抑制SARS病毒基因的小分子干扰RNA (siRNA)重组腺病毒。针对SARS病毒的N基因(nucleocapsid)和E基因(envelope) 分别设计了一系列序列特异性的siRNA,然后通过测定荧光色素酶报道体系的活性对 siRNA进行筛选,并将筛选得到的有效的siRNA序列构建入腺病毒包装载体中得到相应的重组腺病毒。通过半定量RT-PCR,western-blot和荧光色素酶活性测定这些siRNA 及其重组腺病毒对相应SARS病毒基因的干扰作用进行了验证。实验结果表明,重组腺病毒在沉默病毒基因mRNA和蛋白水平上均比对应的载体表达的siRNA更有效。由于腺病毒感染率很高,可以达到100%,所以重组腺病毒可以作为一种有效的抑制病毒基因的有力工具,尤其是用于DNA或者RNA难转染的细胞的研究中。由于重组腺病毒滴度高、作用快、感染力强,重组腺病毒将在实验技术及生物制药中具有广阔的应用前景。

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