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乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒的构建、安全性及免疫原性

徐高原  王祥  陈焕春  徐晓娟  李自力  何启盖  
【摘要】:正设计1对引物从含有乙型脑炎病毒NS1基因的质粒pNS1上亚克隆NS1基因,将 NS1基因插入到中间转移载体pUSK中,获得重组中间转移质粒pUSK-NS1。将 pUSK-NS1与伪狂犬病毒Ea株TK-/gG-/LacZ+突变株基因组共转染真核细胞IBRS-2, 细胞病变后收毒、冻融两次,在24孔板上进行空斑筛选。第一次空斑筛选的阳性率为 83%。空斑纯化四次后阳性率为100%。PCR和southern blot证明所获得的重组病毒却实是乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒株TK-/gG-/NS1+。ELISA和western blot 检测表明,重组病毒能表达具有生物活性的NS1蛋白。以106.0TCID50的剂量分别注射5

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