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用重组TACE胞外功能域从噬菌体展示随机15肽库筛选TACE的抑制肽

黄巍  李凌波  韩玲  杨渝珍  
【摘要】:肿瘤坏死因子转换酶(TACE)是加工裂解TNF-α前体的关键酶,参与了许多炎症的发生发展过程。为通过肽库筛选得到TACE的抑制肽,首先制备筛选靶分子,用RT-PCR从人外周血单核细胞中分别扩增出TACE的催化区(T800)和整个胞外区(T1300),然后分别克隆至pET-28a和pE7-28c中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的蛋白,两者均为包涵体,变性复性后过Ni~(2+)-NTA亲和层析柱得到纯度达90%的重组蛋白。以纯化的重组T800和T1300分别筛选噬菌体展示随机15肽库,对筛选克隆进行ELISA检测、竞争抑制实验和序列分析。从两个独立的筛选过程中得到一个相同的阳性克隆序列“TRWLVYFSRPYLVAT”,固相Fmoc法合成该短肽,观察其在LPS诱导人单核细胞产生sTNF-α中的作用。结果表明,筛选到的短肽可显著抑制TACE的活性,减少TNF-α的分泌,抑制率可达60.3%,为抗炎小分子药物的设计和改造提供线索和依据。

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