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大肠杆菌-酿酒酵母启动子探针穿梭载体的构建

黄玉屏  杨洋  沈萍  沈韫芬  
【摘要】:新霉素抗性基因(neo)是原核生物和真核生物表达载体的常用抗性选择基因。本研究将neo基因与大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体pAJ401重组,构建了以neo基因为报告基因的启动子探针穿梭载体pAJN161,并在neo基因上游插入了多克隆位点,方便克隆外源启动子。此载体的成功构建为同时检测启动子在原核生物和真核生物中的启动功能创造了条件。用pAJN161载体检测从嗜盐古生菌染色体上克隆到的具有大肠杆菌启动子功能的DNA片段,发现RM10和RM14在酿酒酵母中的启动活性远高于酿酒酵母自身的PGK启动子活性,从而为构建高效通用表达载体奠定了良好的基础。

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