大鼠BMSCs和LFs单层共培养后细胞韧带特异性改变

【摘要】：目的:比较单层共培养后对细胞的活性、增殖能力和韧带特异性基因及蛋白表达和合成情况的影响。方法:SD大鼠30只,体重250g左右,通过密度梯度离心法获得骨髓间充质干细胞,胶原酶消化法获得韧带成纤维细胞,传至第三代后分组培养。倒置显微镜观察细胞生长,MTT法检测细胞数量。实时荧光定量PCR检测韧带Collagen typeⅠ、Collagen typeⅢ、Fibronection、Tenascin-C、β-action、MMP-2的mRNA表达水平,ELISA法检测细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白。分组:A组为未诱导的rBMSCs细胞,B组为未诱导的rLFs细胞,C组为未诱导的单层共培养细胞,D组为诱导的rBMSCs细胞,E组为诱导的rLFs细胞,F组为诱导的共培养细胞。结果:共培养细胞(C组)活性及增殖能力与BMSCs相似,细胞韧带相关蛋白分泌及基因活性高于A组,但低于B组,P0.05,有统计学意义,细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白量与LFs(B组)相当。共培养细胞(C组)对于生长因子的诱导反应比A组更明显,其活性和增殖能力提高更多,高于诱导后的D组及E组,P0.05,有统计学意义。韧带相关基因的合成也以诱导后共培养细胞(F组)表达量最高,F组的Collagen typeⅠ、Collagen typeⅢ、Tenascin-C、Fibronection、MMP-2总量高于D组和E组,P0.05,有统计学意义。结论:单层共培养细胞能够与单独培养细胞相比活性、增殖能力、韧带特异性和对诱导条件的反应均相似或略高于后两者,可以作为韧带组织工程学细胞来源之一来研究。