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Kasabach-Merritt综合征裸鼠模型的建立

张翅  金先庆  李晓庆  周德凯  朱进  赵珍珍  梁睿  郭振华  
【摘要】:目的建立血管内皮瘤裸鼠移植模型。观察肿瘤生长情况,了解其生物学特点。方法(1)将浓度为1×10~7/ml EOMA的细胞悬液100?L接种于裸鼠右侧腰背部皮下。对照组在同样部位皮下注射等量PBS。(2)隔日观察肿瘤的生长情况,用游标卡尺记录肿瘤的长径和短径,按以下公式:瘤体体积(mm3)=长径(mm)×短径(mm)2×0.52计算瘤体体积。(3)在接种EOMA细胞前1天、接种后6d、13d及20d取实验组裸鼠外周血行血常规检查。(4)在处死实验组裸鼠前,对肿瘤局部行B超扫查。(5)当实验组中有裸鼠出现嗜睡和行动困难时,所有鼠均予以颈椎脱臼法处死。解剖并切除心脏、肺、肝脏、肾脏、右侧股骨、脾脏和肿瘤组织,并称重脾脏。对各脏器标本行HE染色后光镜检查。(6)在处死裸鼠后,取左侧股骨骨髓,涂片,晾干后行瑞氏染色,最后行光镜观察:计数全片巨核细胞总数,并分类计数25个巨核细胞。结果(1)实验组成瘤率达100%,而对照组无一成瘤。肿瘤体积增大迅速。实验组裸鼠出现不同程度的皮肤苍白,其中有2只鼠出现皮肤紫癜,4只鼠因为肿瘤体积增长过大过快,表面皮肤出现溃疡、出血。实验组与对照组裸鼠从接种前直至处死前,其体重均无差异(P0.05)。(2)随着肿瘤的不断增长,实验组裸鼠外周血RBC计数、Hb、Het、Platelet计数迅速下降(与接种前比较P0.01);WBC计数、MCV、MCH、MCHC与接种前比较无差异(P0.05)。(3)骨髓像显示:实验组裸鼠全片巨核细胞总数,分类计数25个巨核细胞中原始巨核细胞、幼稚巨核细胞、颗粒型巨核细胞及裸核型巨核细胞的比例与对照组相比,差异均无统计学意义(P0.05)。(4)超声检查发现8例肿瘤均仅限于皮下,边界清楚,形态较规则,瘤体呈不均质的低回声团块,并有强回声条状分隔;探头加压试验阳性;脉冲多普勒(Pulse wave doppler,PW)显示瘤体内以静脉血流为主。(5)病理学检查发现其中1只实验鼠心、肾、肝肉眼观表面有出血灶,镜检发现其心肌纤维增粗、心肌纤维间见出血灶,肾实质出血,肝实质出血,肺泡腔内出血。肿瘤镜检发现含众多大小不一囊腔的海绵状结构,囊腔内充满红细胞,囊壁较厚,为增生的肿瘤细胞构成。结论通过局部皮下接种EOMA细胞,成功构建了血管内皮瘤裸鼠模型,成瘤率达100%。该模型表现出类似与Ka- sabach-Merritt综合征的临床特点:瘤体增长快速,血小板进行性减少、微血管病性贫血、凝血功能障碍,是血管瘤基础和临床研究的良好载体。

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