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Ad-EGFP-MDR1体内生物安全的实验研究

赵珍珍  金先庆  宿玉玺  桂琳玲  郭振华  赵利华  
【摘要】:目的检测转染Ad-EGFP-MDR1的骨髓细胞回输后在体内的表达和分布特点,对机体的影响等生物安全性。方法采用细胞注射法建立Bab1/c小鼠结肠癌模型,骨髓细胞转染Ad-EGFP- MDR1有效表达后,通过骨髓腔内骨髓回输到5-氟尿嘧啶化疗的结肠癌模型的Bab1/c小鼠体内。采用免疫组化的方法研究了,各实验组在骨髓回输后第1,3,7,14,21,30天的各组织器官(肿瘤,心,肺,肝,肾,脾,肠,脑)的组织芯片中P-gp的表达。采用原位杂交的方法研究了各时间点各组织器官的外源性人MDR1 DNA的表达。检测各时间点的尾静脉血常规,和各时间点血清中腺病毒特异性抗体的表达。结果成功建立结肠癌动物模型,将含有多药耐药基因MDR1的骨髓细胞回输到实验动物体内。将各时间点的各组织器官标本制作成组织芯片,未检测到人MDR1 DNA在肿瘤中的表达。也未检测到其蛋白P-gp的表达。回输转染细胞组的肾脏,肺脏,小肠在回输后第7d有MDR1的表达,到回输后第30d任有较强表达。在在转染阳性的骨髓细胞中明显有人MDR1 DNA的表达,且转染后1个月的骨髓细胞中任有少量细胞表达人MDR1 DNA。而转染阳性的骨髓细胞有明显表达。转染回输组的血常规分析,白细胞,红细胞,血小板,血红蛋白在回输后第30d与正常组比较没有统计学差异(P0.05)。转染回输组的血清中腺病毒特异性抗体与正常组和未转染回输组比较没有统计学差异(P0.05)。讨论采用组织芯片检测标本中的目的基因及其表达。简便,快速,高通量,统一,节约的优点。并在基因和表达两个水平上进行相关研究,研究表明骨髓回输后各时间点的肿瘤组织中均未检测到的人MDR1 DNA和其蛋白P-gp的表达的。而骨髓细胞中可见人MDR1 DNA的阳性表达,在转染后1个月时骨髓中有少量表达。外源性人MDR1不会在肿瘤细胞中表达。回输转染的骨髓细胞不会导致造血系统的异常,改造的腺病毒没有感染致病性。结论Ad-EGFP-MDR1转染的bab1/c小鼠骨髓细胞体内回输,以保护骨髓,提高化疗剂量在毒性方面的检测是安全有效的。是临床前期安全性研究的基础,为后续进一步行临床各期研究提供了参考依据。

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