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亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定

戴佳琳  吴璇  黄江  杜武英  胡旭初  徐劲  余新炳  
【摘要】:目的对亚洲牛带绦虫(Taenia asiatica)成虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4(Actin related protein 2/3 complex subunit 4)基因进行克隆、表达和免疫学初步研究。方法以亚洲牛带绦虫cDNA文库中肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4的已知序列设计合成一对特殊引物,进行P℃R技术扩增目的基因,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,在CaCl2制备的感受态大肠杆菌BL21/DE3中经过IPTG诱导目的基因表达,表达产物经过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定。由于蛋白在包涵体表达,故通过N-十二烷基肌氨酸钠(SKL)法纯化获得纯化重组蛋白并用蛋白印迹(Western-blotting)进行免疫学分析。结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-Arp2/3重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明基因在大肠杆菌BL21/DE3包涵体中表达,经过包涵体沉淀的溶解、重折叠和离子交换层析方法获得高纯度蛋白。重组蛋白能识别亚洲带绦虫病人血清及牛带绦虫病人血清,表明有免疫反应性。结论成功克隆亚洲带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4基因,表达和纯化得到了该基因的重组蛋白并且证明该基因具有免疫反应性,为进一步研究该基因的功能提供条件。

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