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Cloning and Expression of the SDISP of Schistosoma japonicum Chinese Strain in E.coli

【摘要】:正[Objective]To perform cloning of the full-length gene encoding succinate dehydrogenase iron-sulfur protein of Chinese Schistosoma japonicum(SjSDISP) and its expression in Escherichia coli.Methods According to the published incomplete EST of SjSDISP and the sequence of multiclone sites ofλgt11 vector,2 pair of primers were designed.,then the 3' and 5' terminus of the expression sequence tag(EST) of the SjSDISP were amplified by anchored PCR from adult Schistosoma japonicum cDNA library.After sequencing,the full-length cDNA sequence of the SjSDISP was obtained, subsequently were cloned into prokaryotic expression pGEX-4T-1 vector.Characterized by agarosed gel electrophoresis, endonucleases digestion and PCR,the resultant recombinant plasmid was used for expression under the temperature-dependent condition and Western blot analysis.Results A 107 1bp sequence was obtained.Sequence analysis indicated that this fragment contained a complete open reading frame(ORF) of SjSDISP,which coding for a protein of 278 amino acids.This target fragment was cloned into the prokaryotic expression vector pGEX-4T-1,sequenced and expressed in Escherichia coli.SDS-PAGE revealed that the molecular weight of the expressed fusion recombinant product was 56kDa. Western-blot showed that the recombinant protein was recognized by polyclonal rabbit antiserum immunized with Schistosoma japonicum adult worm antigen,which indicated that the expressed product had good antigenicity. Conclusion Cloning of the full-length gene encoding SjSDISP and its bacterial expression were successfully made.

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