【摘要】：目的从人源化噬菌体抗体库(Human Single Fold scFv Libraries I+J)中筛选到能高亲和性、特异结合人禽流感病毒H5N1的单链抗体,为建立H5N1快速筛查试剂和人源化治疗单抗奠定基础。方法以H5N1病毒的血凝素(Hemagglutitin,HA)蛋白和核蛋白(Nucleoprotein,NP)为目的蛋白,对上述单抗噬菌体文库以亲和性为原理进行筛选,经过三轮筛选富集后,随机挑选了96个噬菌体克隆扩增培养,ELISA法挑选能特异性、高亲和性结合目的蛋白的噬菌体克隆,并换用HB2151宿主菌对阳性单链抗体克隆进行可溶性表达,ELISA法鉴定可溶性单链抗体的结合活性,PCR扩增阳性克隆的轻、重链基因片段,并对阳性单链抗体分子测序和序列分析。结果经过三轮筛选,分别从96个噬菌体克隆中挑选到了两株能特异结合NP蛋白、三株能特异结合HA蛋白的单链抗体,PCR扩增都得到了长为300bp、302bp和935bp的轻链、重链和轻链-连接片段-重链的基因片段,测序结果分析发现上述五条单链抗体片段在轻链的47、49、50、51、53、54、56、96、97、98和99位的氨基酸组成不同,而特异结合NP蛋白的单链在重链区域氨基酸组成完全相同,而特异结合HA蛋白的单链在重链的44、47、85、86、87、88和89位氨基酸组成不同。结论从噬菌体抗体库中筛选到的特异结合HA和NP蛋白的单链抗体片段,可为进一步研发H5N1快速筛选试剂和人源性治疗抗体奠定基础,也可为鉴定HA和NP蛋白中的抗原决定簇提供结构信息。