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正交设计法优化印度南瓜SRAP反应体系

刘泽发  孙小武  罗伏青  严钦平  
【摘要】:利用L4~5正交设计对影响南瓜SRAP反应体系的MgCl_2浓度、dNTPs浓度、Taq酶含量、引物浓度、模板DNA浓度5个因素进行了筛选,快速得到稳定性和重复性好的南瓜SRAP扩增体系。另外对复性温度、PCR循环次数等影响南瓜SRAP扩增结果的重要因素进行了优化。最终优化的南瓜SRAP反应体系为25μL反应液中:10×buffer2.5μL,0.2 mmol/L dNTPs,引物0.2μmol/L,1.5mmol/L MgCl_2,DNA模板6ng/pL,Taq酶1.5U。本研究最终确立的PCR反应程序为:94℃预变性5 min,然后按94℃变性40 s,35℃退火40 s,72℃延伸90 s,进行5个循,94℃变性40 s,50℃退火40 s,72℃延伸90 s,进行32个循环,最后72℃延伸5 min。在此条件下得到的SRAP标记可为印度南瓜遗传多样性、分子标记及辅助育种等研究提供稳定有效的手段。

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