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葡萄白藜芦醇合酶基因cDNA克隆及原核表达

付洪冰  张俊华  崔崇士  
【摘要】:从东北山葡萄中提取总RNA,采用RT-PCR方法,克隆到了白藜芦醇合酶(Resveratrol Synthase,简称RS)基因的全长cDNA。将测序结果进行分析、拼接,用Primer Premier5.0软件将序列转化为氨基酸序列,与GenBank中己登录的圆叶葡萄、华东葡萄、河南毛葡萄、河岸葡萄、酿酒葡萄进行同属RS基因编码的氨基酸同源性比对,与GenBank中已登录的羊蹄甲、花生、虎杖、大黄进行不同属RS基因编码的氨基酸进行同源性比对,结果表明:东北山葡萄与其它葡萄的RS基因编码的氨基酸同源性达到97%以上;东北山葡萄与其它属的RS基因编码的氨基酸同源性达到64%以上。生物信息学分析表明,该蛋白分子量为43kD,等电点pI=6.2,包含392个氨基酸残基。将RS cDNA片段插入到表达载体pET28a中构建重组表达质粒pET28a-RS,转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE电泳检测结果表明,以30℃、0.5 mmol.L~(-1)IPTG诱导4小时时该基因表达效果最好,诱导产物为一个约43kD的蛋白,为进一步纯化和鉴定目的蛋白提供了基础。

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