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人脐静脉内皮细胞体外培养方法的改进

易龙  陈春烨  金鑫  于斌  舒芙蓉  麋漫天  
【摘要】:目的建立一种能大量分离人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的体外培养方法,为血管内皮细胞的大规模体外实验研究奠定基础。方法比较0.25%胰酶、0.1%Ⅰ型胶原酶、0.25%胰酶与0.1%Ⅰ型胶原酶(1:1)三种消化方法分离 HUVECs 的细胞数量和活细胞率的差异。观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)对细胞生长的影响。细胞鉴定采用形态学观察和免疫荧光法检测。结果 0.1%Ⅰ型胶原酶单独或混合0.25%胰酶消化分离细胞数量较多、活细胞率较高(P0. 05)。VEGF 能明显促进细胞增殖能力,延长细胞自然生长时间。细胞呈单层"铺路石"样排列, 免疫荧光细胞化学法染色,激光共聚焦检测可见胞浆中绿色荧光颗粒。结论Ⅰ型胶原酶与胰酶混合消化 HUVECs 是获取血管内皮细胞的一种经济且效果较好的方法,添加 VEGF 能明显促进细胞增殖,可用于构建体外研究血管内皮细胞的模型。

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