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绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)整合子检测及疑似氨基糖苷类抗性新基因的报道

赵克雷  粟敏  帕哈尔定·帕拉哈提  张修月  岳碧松  
【摘要】:绿脓杆菌是报道较早的对多种抗生素抗性较强并且耐药基因报道最多的细菌。2009~2010年期间共从米亚罗林麝养殖场32个林麝脓肿病病样中分离到8株绿脓杆菌,使用琼脂稀释法对8株绿脓杆菌进行最小抑菌浓度实验(MIC),同时培养8株细菌提取基因组DNA和质粒,扩增整合子Class 1和Class 2,产物测序后在GenBank中比对后确认。MIC实验结果表明本次分离的绿脓杆菌对喹诺酮类抗生素较为敏感,对β-内酰胺类和氨基糖苷类抗生素具有较高的抗性;质粒分析结果表明有6株绿脓杆菌具有24kb和3kb两个质粒,在基因组DNA上没有检测到整合子的存在,在大质粒上检测到Class 1整合子,序列比对结果显示其中包括耐药基因aadA1和blaP2,在小质粒上用Class 2整合子引物扩增后得到一段392bp的未知序列,将小质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细胞后在分别包含128μg/mL的头孢他啶、头孢噻肟、阿米卡星和链霉素的LB琼脂培养基上过夜培养,在含阿米卡星的培养基上得到三株E.coil DH5α,分别抽提质粒得到3kp大小的质粒,再用Class 2整合子引物扩增后得到与之前完全一致的序列。该序列初步鉴定为新的Class 2氨基糖苷类耐药基因,其功能将进一步研究。

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