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分子手段的大熊猫性别鉴定技术

徐霄  李玉芝  汪小方  韦鵾  张文平  张致和  沈富军  岳碧松  
【摘要】:被誉为"活化石"的大熊猫Ailuropoda melanoleuca是我国特有的珍稀濒危动物,被国际自然保护联盟(IUCN)列为濒危物种。历史上,大熊猫曾经广泛分布在中国的东部和南部,但是由于栖息地的退化和各种人类活动的干扰,目前大熊猫仅仅分布在青藏高原东部边缘的六个相互隔离的山系:秦岭,岷山,邛崃,大相岭,小相岭以及凉山。第三次大熊猫调查表明野外大熊猫的数量仅为1600多只,目前第四次大熊猫调查正在筹划中。作为大熊猫调查中的一项内容,野生大熊猫种群的性别比例一直是一个难题,一方面由于在野外不容易观察到大熊猫,另一方面大熊猫没有表现出明显的第二性征,从外表观察难于辨别其性别。分子手段的性别鉴定技术和非损伤样品DNA提取技术的发展为这一难题提供了解决办法。我们开发了基于PCR的分子性别鉴定技术:(1)扩增锌指蛋白基因(ZFX/ZFY)中存在长度多态性的同源序列,雌性个体中扩增出一个条带(354 bp),而在雄性个体中则扩增出两个条带(354 bp,135 bp);(2)扩增牙轴蛋白基因(AMELX/AMELY)中存在长度多态性的片段,雌性个体扩增出一个条带(237 bp),雄性个体扩增出两个条带(237 bp,174 bp);(3)在等长的锌指蛋白(ZFX/ZFY)同源序列中,设计ZFY特异引物,用突变特异性扩增(ARMS)鉴定性别,雌性个体扩增出两条带(447 bp,146 bp),雄性个体扩增出三条带(447 bp,146 bp,350 bp)。通过观察未知性别样品各个系统的扩增条带,就能够判断该样品的性别来源。我们的这套性别鉴定技术的稳定性和准确性在血液,毛发以及粪便来源的DNA样品中得到了验证,并且被证明可用于准确鉴定黑熊和棕熊的性别。

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