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基于易错POR技术的短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)脂肪酶YZO2的定向进化

闫云君  蔡勇  杨江科  
【摘要】:利用易错 PCR 技术对短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)YZ02脂肪酶基因 BpL 进行两轮定向进化研究,分别获得最佳突变株:BpL1-7和 BpL2-1369,其脂肪酶活力比出发酶分别提高了2倍和6倍。序列分析表明,突变体 BpL2-1369有4个碱基发生了突变:T61C/C147T/A334G/T371A,其中有3个碱基突变导致了氨基酸的改变。通过 SWISS-MODEL 数据库模拟脂肪酶的结构显示,3个突变氨基酸分别位于第1个α螺旋的第3个氨基酸、第4和第5个β折叠之间的转角以及第5个β折叠的第1个氨基酸位置。将野生型脂肪酶基因 BpL 和进化后的基因 BpL2-1369的高效表达产物经 Ni-Agarose 柱和 Sephadox-G75纯化后,酶学性质测定表明:突变脂肪酶的比活力比野生型脂防酶提高了1.31倍,K_m 值由8.24mmol/L 降低至7.17mmol/L;在 pH>8.0时的稳定性较野生型脂肪酶有所提高。

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