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超声联合阳离子脂质微泡增强基因转染的研究

张丽  谢明星  吕清  王新房  刘莹莹  黄桂  
【摘要】:目的制备阳离子脂质超声微泡(CLM),评价其理化性质及毒性反应,并探讨超声联合CLM介导绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染的增强作用。方法①阳离子脂质微泡的制备及质量研究:采用薄膜水化法制备CLM,分别于1 h、24 h、3 d、7 d、14 d光镜及电镜下观察其形态,纳米激光粒度测量其粒径及电位,检测其稳定性;急性细胞毒性实验和急性动物毒性实验观察其毒性;②探讨不同转染方式对绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染的增强作用。实验分组:裸质粒组(P组)、超声辐照+裸质粒(P-US组)、裸质粒+超声微泡(P-CLM组)、裸质粒+超声微泡+超声辐照(UTMD组)。荧光显微镜观察EGFP的表达情况,流式对EGFP表达行定量分析。结果①光镜及电镜下观察,CLM呈球形,大小一致,分布度好;CLM均为纳米级,粒径范围分布于(250.4±88.32)~(399±99.8)nm;电位分布于(18.8±4.97)~(20.1±3.1)mV;体内、外急性毒性实验均示无毒性。②荧光显微镜观察,各组于转染48 h后均可见EGFP表达。UTMD组EGFP表达分布最多,亮度最强,P-CLM组次之,以P组最弱;流式细胞仪定量分析结果与荧光显微镜观察结果一致。与P组比较,P-US、P-CLM及UTMD组转染率增加;P-US组比较,P-CLM和UTMD组转染率效率均增加;与P-CML组比较,UTMD组转染效率明显增加,差异均有统计学意义(P0.05)。P-US转染效率较P组增加近6倍;P-CLM组较P组增加约10倍;UTMD组较P组增加近30倍。结论采用薄膜水化法成功制备表面带正电荷纳米级CLM,粒径分布均匀,无毒副作用;超声联合CLM可显增EGFP转染至靶细胞。

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